Metode folosite in hematologie

Determinarea hemoleucogramei Se realizeaza pe un analizor automat de hematologie ce permite determinarea a 21 de parametri ai hemoleucogramei - inclusiv diferentierea leucocitelor in 5 populatii - prin urmatoarele metode: 1) Focusare hidrodinamica (impedanta electrica); 2) Citometrie in flux cu laser semiconductor; 3) Masurarea cu SLS (sodium lauril sulfat) a hemoglobinei prin metoda fotometrica. 1) Metoda cu focusare hidrodinamica Prin aceasta metoda sunt determinate numarul si dimensiunile eritrocitelor si trombocitelor. Scopul focusarii hidrodinamice este de a reduce suprapunerea si recircularea celulelor in zona de detectie. Dupa aspirare si diluare cu reactiv, particulele sunt directionate intr-un singur rand printr-o apertura si genereaza semnale electrice pulsatorii, pe baza carora se efectueaza numaratorile celulare. 2) Citometria in flux Numarul de leucocite si formula leucocitara sunt determinate, dupa lizarea eritrocitelor, cu ajutorul citometriei in flux, care permite analizarea caracteristicelor fizice si chimice ale celulelor. Proba de sange este aspirata, diluata si colorata. Celulele sanguine trec apoi in linie, una cate una, prin centrul camerei de flux, unde raza laser emisa de semiconductor loveste celulele sanguine. Ca urmare, lumina va fi dispersata in directii diferite. Lumina dispersata frontal si captata de o fotodioda  indica volumul celular, lumina dispersata lateral furnizeaza informatii asupra continutului celular (nucleu si granulatii), iar lumina fluorescenta laterala aduce informatii despre cantitatea de ADN si ARN celular. Lumina dispersata lateral si cea fluorescenta laterala sunt receptate de un tub fotomultiplicator. In final, analizorul va afisa doua scatergrame bidimensionale: - pe scatergrama 4DIFF (axa x reprezinta intensitatea luminii laterale, iar axa y intensitatea fluorescentei laterale) apar cele 5 populatii leucocitare si grupul de umbre eritrocitare; - pe scatergrama WBC/BASO (axa x reprezinta intensitatea luminii laterale, iar axa y intensitatea luminii frontale) apar populatia de bazofile si restul populatiei de leucocite, precum si grupul de umbre eritrocitare. 3) SLS - Hemoglobina Analizorul determina direct concentratia hemoglobinei cu ajutorul surfactantului Sodiu-Lauril-Sulfat (SLS). Reactia chimica include urmatoarele etape: hemoliza eritrocitelor, alterarea conformatiei moleculei de globina, oxidarea fierului si formarea SLS-Hb care este masurata fotometric. Metoda nu este toxica, iar viteza de conversie a hemoglobinei este mare. Metoda se poate utiliza si pentru masurarea methemoglobinei, deci si a sangelui de control ce contine methemoglobina. Parametrii analizati sunt urmatorii: a) eritrocitari: - numarul de eritrocite; - hemoglobina (Hb); - hematocritul (Ht); - indicii eritrocitari - volumul eritrocitar mediu (VEM), hemoglobina eritrocitara medie (HEM), concentratia medie a hemoglobinei(RDW), largimea distributiei eritrocitare (RDW); b) leucocitari: - numarul total de leucocite - formula leucocitara in valori relative (%) si absolute (#) c) trombocitari: - numarul de trombocite; - trombocitocritul (PTC); - volumul trombocitar mediu (VTM); - largimea distributiei trombocitare (PDW). Dintre acestia, analizorul masoara direct numarul de leucocite si formula leucocitara, numarul de eritrocite, hemoglobina, hematocritul si numarul de trombocite. In afara parametrilor hemoleucogramei  si a celor doua scatergrame, analizorul mai  afiseaza si doua histograme pentru eritrocite si trombocite, ce indica numarul de celule si distributia acestora in functie de volum. De asemenea analizorul poate detecta celulele anormale sau imature afisand diferite mesaje de avertizare generate de localizarea anormala a populatilor celulare pe scatergramele WBC/BASO sau 4DIFF, cum ar fi: I. Leucocite: Avertizari si parametrii cheie (in paranteza): - Modificari anormale - neutropenie (neut#, neut%), neutrofilie (neut#, neut%), limfopenie (limf#, limf%), limfocitoza (limf#, limf%), monocitoza (mono#, mono%), eozinofilie (eo#, eo%), bazofilie (ba#, ba%), leucopenie (le#), leucocitoza (le#). Valorile limita sunt in functie de valorile normale corespunzatoare varstei pacientului. - Suspect - blasti?, granulocite imature?, deviere la stanga?, limfocite atipice?, precursori eritrocitari nucleati? Sunt detectati prin citometrie in flux sub forma unor populatii aparte ce apar pe citogramele WBC/BASO sau DIFF. II. Eritrocite: Avertizari si parametrii cheie (in paranteza): - Modificari anormale - dimorfism eritrocitar (histograma), anizocitoza (RDW-SD, RDW-CV), microcitoza (VEM), macrocitoza (VEM), hipocromie (CHEM), anemie (Hb), eritrocitoza (Nr. eritrocite). Ca metoda de detectie este folosita histograma pentru eritrocite, valorile limita fiind calculate in functie de valorile normale corespunzatoare varstei pacientului. - Suspect - aglutinare eitrocitara? (Nr eritrocite, CHEM, HEM), turbiditate/interferenta cu determinarea Hb? (CHEM), deficit de Fe? (CHEM, VEM, RDW-CV) Citeste mai mult