Electroforeza hemoglobinei
Descriere
Hemoglobina reprezinta elementul esential pentru principala functie fiziologica a eritrocitului: functia respiratorie. Hemoglobina este o cromoproteina porfirinica care contine fier, in structura sa intrand o parte proteica - globina - si o parte prostetica - hemul. Globina difera ca structura de la o hemoglobina la alta, ea imprimand specificitate diverselor hemoglobine cunoscute. In cursul dezvoltarii organismului de la embrion la adult se succeda mai multe tipuri de Hb; hemoglobinele embrionare Gower 1, Gower 2 si Portland sunt inlocuite incepand cu cea de-a 3-a luna de gestatie de catre Hb fetala (HbF), care reprezinta 70-80% din totalul Hb la nou-nascut, dupa care sinteza sa scade rapid, ajungand la sfarsitul primului an de viata la valori sub 2% din totalul Hb. Hb A si Hb A2 sunt caracteristice perioadei adulte de dezvoltare; sinteza lor incepe inca din perioada fetala, iar dupa nastere ele inlocuiesc rapid Hb F. La adultul normal, Hb A reprezinta 97-98%, HbA2 2-3%, iar HbF sub 1%. Hb A este caracterizata in mod obisnuit prin mobilitatea sa electroforetica, prin afinitatea pentru O2 si prin viteza de denaturare in mediul acid si alcalin. Hb F se caracterizeaza prin rezistenta crescuta la denaturarea alcalina, proprietate pe care se bazeaza si determinarea ei chimica, si prin afinitate crescuta la O2 in raport cu Hb A. Valori crescute de Hb F fata de normal se gasesc in diverse situatii fiziologice sau patologice: sarcina, anemii severe diverse, anemie Biermer, leucemii, hipertiroidie, persistenta ereditara de Hb F, β- talasemia hetero- si homozigota, alte hemoglobinopatii. Hb A2 poate fi usor separata electroforetic de Hb A intrucat are o mobilitate electroforetica evident mai lenta decat a Hb A. Prin electroforeza hemoglobinei pot fi detectate fractiuni normale sau patologice, pozitia benzilor obtinute fiind comparata cu cea a benzilor standard furnizate de materialul de control. 1. In β-thalassemia minima si minora valorile Hb A2 sunt crescute (3,2%- 7%), iar Hb F este usor crescuta (0.5-6%) in peste 50% din cazuri, restul fiind reprezentat de Hb A; 2. In β-thalassemia intermedia Citeste mai multPentru a utiliza ghidul de interpretare al analizelor trebuie sa urmati pasii de mai jos.
- Selectati optiunea barbat / femei / copil in functie de persoana care a efectuat analiza;
- Introduceti valoarea din buletinul de analize in prima casuta;
- Selectati unitatea de masura a acesteia din a doua casuta (acolo unde este cazul);
- Apasati butonul "Interpreteaza" pentru a interpreta analiza
Recomandari
Recomandari pentru efectuarea electroforezei de hemoglobina:
Diagnosticul hemoglobinopatiilor si sindroamelor talasemice a caror suspiciune este indicata de:
- anemia hemolitica cronica;
- criza ocluziva vasculara de cauza necunoscuta la un pacient provenit din zone cu niveluri crescute ale Hb S si/sau Hb C;
- sindromul de hidrops fetal de cauza necunoscuta;
- aspect sugestiv al hemogramei, cu microcitoza si hipocromie mai severe decat ar fi de asteptat pentru gradul anemiei si numar de eritrocite la limita superioara a normalului sau chiar crescut, asociate cu un numar mare de hematii in tinta si punctatii bazofile pe frotiul de sange. In aceasta situatie, pentru diferentierea de deficitul de fier, este util indicele Mentzer = VEM/nr. de eritrocite (x106):
- >14 - sugestiv pentru deficit de fier;
- 12-14 rezultat echivoc;
- <12 sugestiv pentru tara talasemica.
Pregatire pacient
Se recolteaza a jeun (pe nemancate) sau postprandial (dupa mese).Metoda
Intr-un camp electric particulele incarcate cu o anumita sarcina electrica se deplaseaza in functie de intensitatea campului electric, de incarcarea lor electrica, de marimea si forma moleculei. In cazul hemoglobinelor anormale modificarea structurala duce la modificarea sarcinii electrice, ceea ce permite migrarea si separarea lor electroforetica. Electroforeza de Hb folosind ca suport de migrare gelul agar este o metoda rapida si sensibila, permitand separarea Hb fiziologice si patologice, inclusiv a fractiilor minore.Pentru cadre medicale
Specimen recoltat - sange venos.
Cauze de respingerea probei - specimen coagulat.
Recipient de recoltare - vacutainer cu K3 EDTA.
Cantitate recoltata - cat permite vacuumul.
Prelucrare necesara dupa recoltare - sangele se centrifugheaza. Eritrocitele se separa si se spala cu ser fiziologic. Apoi, ele sunt hemolizate folosind reactivul hemolizant din kit. Hemolizatul se supune electroforezei imediat; eventual, el poate fi pastrat la 2-8° C. Sangele integral si eritrocitele spalate, de asemenea, pot fi pastrate la 2-8° C. In nici un caz vacutainerul cu sange recoltat pe K3 EDTA nu se introduce in congelator!!! (se produce hemoliza).
Stabilitate proba - sangele integral este stabil 28 zile la 2-8° C; eritrocitele spalate sunt stabile 28 zile la 2-8° C; hemolizatul este stabil 36 ore la 2-8° C.
Limite si interferente
Transfuziile de sange pot dilua o eventuala hemoglobina anormala, pentru o perioada de 3-4 luni, interferand cu rezultatele electroforezei.
Hiposideremia poate determina obtinerea de valori fals scazute pentru Hb A2; daca exista o neconcordanta intre rezultatul obtinut pentru HbA2 si suspiciunea clinica de betatalasemie minor, pacientul va fi tratat cu fier, pana la normalizarea sideremiei, apoi se va repeta electroforeza de hemoglobina.
Interferente analitice:
- Centrifugarea ineficienta si/sau spalarea eritrocitelor cu solutii saline nu vor furniza o hemoliza clara. Aceasta poate rezulta in prezenta liniei rosii la aplicarea punctelor pe banda, ceea ce indica o calitate slaba a pattern-ului electroforetic.
- Probele inghetate pot produce benzi false langa cea a HbA.
